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ELISA檢測試劑盒的幾種方法
更新時(shí)間:2015-09-11   點(diǎn)擊次數:3062次

研究經(jīng)驗指出ELISA檢測試劑盒可以用來(lái)檢測血清樣本,看有還是沒(méi)有某個(gè)抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。

樣品收集:
1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內毒素試管。
2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA.Na2,樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。
3. 細胞培養上清:取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。
4. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測.
6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。
7. 樣品收集后若不及時(shí)檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃冰箱內,避免反復凍融,1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進(jìn)行檢測。
8. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,請根據實(shí)際情況,做適當倍數稀釋?zhuān)ńㄗh先做預實(shí)驗,以確定稀釋倍數)。

不同批次的ELISA檢測試劑盒在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過(guò)批批檢的項目其檢測結果也存在差異,因此必須選擇和訂購長(cháng)批號的試劑,并保證保存條件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑,并且能夠保證結果的穩定性;對于效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復凍融造成試劑的失效。

ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響,結果重復性較差,質(zhì)量較難控制。

上海通蔚生物科技有限公司

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