相信經(jīng)常用elisa試劑盒做實(shí)驗的人都知道，有四種常用的方法來(lái)檢測，他們分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。今天給大家分享下他們的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。
1.間接法（indirect ELISA）
此測定方法與直接法類(lèi)似，差別在于一級抗體沒(méi)有酶標記，改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來(lái)測定抗原量。
優(yōu)勢：二抗可以加強信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它*多的免疫反應性。
缺點(diǎn)：交互反應發(fā)生的機率較高。
2.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量；或不標記，再透過(guò)酶標記的二級抗體來(lái)測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。
優(yōu)勢：高靈敏、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事先純化。
缺點(diǎn)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結合部位。
3.直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢：操作手續簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應。
缺點(diǎn)：試驗中的一抗都得用酶標記，但不是每種抗體都適合做標記，費用相對提高。
4.競爭法（competitive ELISA）
樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體，當樣品里的自由抗原越多，就可以結合越多的抗體，而固定抗原就只能結合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗步驟，洗去自由抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來(lái)與只有固定抗原的對照組結果相比較，根據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本，而且數據再現性很高。
缺點(diǎn)：整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。
